布鲁氏菌DNA的光度法测定

本文从材料与方法、测试、过程，以及结果讨论等几部分内容分析了用光度法测定37株布鲁氏菌DNA，一是细菌DNA热变性温度法G+CMol%，二是用液相分子杂交法测与布氏菌DNA杂交率D%V。

材料与方法

仪器系Epoch超微量分光光度计，其性能良好、方法简便。

检测菌种为本所保存的布鲁氏菌国际标准菌株，国内外常用的试验菌株和免疫菌株以及其他省市区送来的可疑布鲁氏菌菌株，共37株。应用苯酚氯仿混合法提取DNA。

对照菌种大肠杆菌K12小耶尔森氏0:9菌、绿脓杆菌、鼠伤寒菌136、痢疾杆菌197均系内蒙古卫土防疫站提供。

测试过程

测样仪器性能与标准的调试：以热变性温度法试验测定待检菌的DNA，方法按文献。开机予热30min，波数准确率士50cm-1，波长精度+0.4nm时，用记录仪扫描苯蒸发峰.结果与标准峰形相符。透过率情度T为士0.2~3%T，仪器杂散光最大值不大于0.3%T。测定仪器稳定性在3min内暗电流漂移。对透光度的影响不大于士0.IT;光电流漂移不大于0.4%，TA转换精度实测结果不大于0.34%T，调整零线，从零开始扫描直到扫描停止，出现一条直线。

布氏菌DNA定性定里Ml]定：纯的天然DNA脱氧核搪核酸波长为260nm，OD值相当于50ug/ml，可用简便的吸光法测定其峰形，将提取的DNA样品按文献方法测定。曾将本所卡尔蔡斯耶那紫外仪与内蒙古大学生物系岛津2500型紫外可见分光光度计进行测试对比，结果两台仪器的吸收峰值是一致的。

布氏菌DNA纯度的测定：将提取的DNA样品稀释液，按其最大吸收峰接近波长260nm，杂质和蛋白质的两个吸收峰分别在230nm和280nm波长处。用紫外分光法来估计DNA样品天然的纯度，DNA吸光度比例为：260:230:280nm一l:0.450:0515。共测定细菌DNA64次。

对于测量结果的讨论

仪器性能的可信性应用紫外光谱仪不仅测试了联合国布病专家委员会公布的6个种19个生物型的标准布氏菌及国内外常用的布氏菌苗菌株l04M，S2苗DNA同源性，符合布氏菌G，CMol%。同时也测定了其他5种对照菌大肠杆菌、耶尔森氏0:9菌，绿脓杆菌、鼠伤寒菌、痢疾杆菌，它们均符合各自DNAG+CMol%范围，而与布氏菌DNA杂交率均小不70%,21.1%~53.6%，证明本方法可靠。

DNA测定的价值在实际应用中做了内蒙古三个县人间检出5株可疑布氏菌和兄弟省市区的7株可疑布氏菌DNA同源性测定，它们的DNAG+CMol%和布氏菌DNA杂交率均符合布氏菌，结合细菌表形特征，定为布氏菌，从而解决了可疑病人、病畜的诊断和疫区判定问题。故本作者认为用光度法在此点上优于血清学、细菌学等传统的检测手段。