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NanoDrop 1000超微量分光光度计检测蛋白BCA

 

BCA(Bicinchoninic Acid)蛋白定量法可以用NanoDrop 1000超微量分光光度计来检测对蛋白浓度。它通常用来检测浓度较低的蛋白溶液,或者检测那些在280nm处有吸收的杂质的蛋白样本。与蛋白A280nm检测不同,BCA法需要在每一次检测时建立一标准曲线,这样未知蛋白才能被检测。在562nm处检测Cu-BCA的鳌合物,在750nm处标准化结果。检测过程中用到的BCA合CuSO4可以从多个厂家购买试剂盒。

样本需要的体积

建议使用2ul样本以获得准确的结果。

蛋白样本的清理

由于蛋白溶液中存在表面活性剂,这样样品基座上的残留如果不能完全清理的化会影响液柱的形成。如果发生这情况,使用无尘纸擦拭基座15-20次,这样可以清理基座,使液柱易形成。

检测浓度范围

nanodrop1000超微量分光光度计蛋白BCA检测

注意:由于NanoDrop-1000能够检测较高的蛋白浓度,你需要准备标准蛋白时也要相应准备较高的浓度。

独特的屏幕特征

  • ViewStandardCurve(F8):通过选择这个键用户可以在任何时候查看标准曲线
  • SampleType:选择是:Reference,Standards1-7,以及andSample,软件指导你首先进行reference检测,然后在检修样本前至少需要以个标准品。
  • Replicate#:在检测reference盒标准品时跟踪记录检测的次数。
  • ResetWindow(F11):清除所有标准品的检测
  • ResetThisStd(F12):清除当前标准品的检测
  • Absorbanceat562nm:Cu-BCA混合物在1mm光程下在562nm处的吸光值
  • and Abs:用户可以选择波长和相应的吸光值。可以通过移动指针或使用波长盒左边的上/下箭头来选择波长。
  • mg/ml:未知样本的蛋白浓度
  • 显示报告:200个样本版式,然而可扩增最多容纳上千个样本。

进行BCA检测

每次检测时需要首先建立一标准曲线。虽然标准曲线可以保存并在下次使用时可以被重新输入,但我们建议按照试剂厂家的建议在每次使用时都进行标准曲线检测。标准曲线的生成被整合到软件中。标准曲线可以通过使用一个参照(仅有BCA试剂,没有蛋白)盒一个标准品建立。多点标准曲线的建立最多对7个标准品有进行5个重复检测,对标准品的检测没有必需的顺序。

对未知蛋白的检测有以下3步:

步骤1:检测参照(仅有BCA试剂,没有蛋白)。软件必须首先检修一个参照盒至少一个标准品,或者检测两个标准品,然后才能进行样品检测。

步骤2:检测标准品。对每个标准品,最多可以进行5个重复检测,

步骤3:样品检测。当标准曲线建立完成后,红色钮变成绿色,这表示用户可以开始进行样品检测了。通过标准曲线和样品的吸光值来计算样品的浓度。

标准曲线特征

标准曲线能被保持并重新登陆,使用 StandardCurve 下拉菜单选择保存或重新登陆功能,选择 ViewStandardCurve 键让用户在任何时候查看曲线。

TheDeletePoint键使用户删除点,首先选择表格中需要删除点的数据,然后点击 DeletePoint 键进行删除。如果对一特定的标准品产生错误的或者非典型的读数,所有重复检测的数据可以通过选择 Resetthisstd 来清空,而且所有标准曲线可以通过 Reset This Window (F11)来删除。

退出BCA模块

建议在完成所有操作后再退出NanoDrop1000超微量分光光度计BCA模块软件。

文章标签:超微量分光光度计应用nanodrop1000蛋白测定 评论收藏分享

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