NanoDrop 1000超微量分光光度计检测蛋白BCA

 

BCA(Bicinchoninic Acid)蛋白定量法可以用NanoDrop 1000超微量分光光度计来检测对蛋白浓度。它通常用来检测浓度较低的蛋白溶液，或者检测那些在280nm处有吸收的杂质的蛋白样本。与蛋白A280nm检测不同，BCA法需要在每一次检测时建立一标准曲线，这样未知蛋白才能被检测。在562nm处检测Cu－BCA的鳌合物，在750nm处标准化结果。检测过程中用到的BCA合CuSO4可以从多个厂家购买试剂盒。

样本需要的体积

建议使用2ul样本以获得准确的结果。

蛋白样本的清理

由于蛋白溶液中存在表面活性剂，这样样品基座上的残留如果不能完全清理的化会影响液柱的形成。如果发生这情况，使用无尘纸擦拭基座15-20次，这样可以清理基座，使液柱易形成。

检测浓度范围

注意：由于NanoDrop-1000能够检测较高的蛋白浓度，你需要准备标准蛋白时也要相应准备较高的浓度。

独特的屏幕特征

• ViewStandardCurve(F8)：通过选择这个键用户可以在任何时候查看标准曲线
• SampleType：选择是：Reference，Standards1-7,以及andSample，软件指导你首先进行reference检测，然后在检修样本前至少需要以个标准品。
• Replicate#：在检测reference盒标准品时跟踪记录检测的次数。
• ResetWindow(F11)：清除所有标准品的检测
• ResetThisStd(F12)：清除当前标准品的检测
• Absorbanceat562nm：Cu－BCA混合物在1mm光程下在562nm处的吸光值
• and Abs：用户可以选择波长和相应的吸光值。可以通过移动指针或使用波长盒左边的上/下箭头来选择波长。
• mg/ml：未知样本的蛋白浓度
• 显示报告：200个样本版式，然而可扩增最多容纳上千个样本。

进行BCA检测

每次检测时需要首先建立一标准曲线。虽然标准曲线可以保存并在下次使用时可以被重新输入，但我们建议按照试剂厂家的建议在每次使用时都进行标准曲线检测。标准曲线的生成被整合到软件中。标准曲线可以通过使用一个参照（仅有BCA试剂，没有蛋白）盒一个标准品建立。多点标准曲线的建立最多对7个标准品有进行5个重复检测，对标准品的检测没有必需的顺序。

对未知蛋白的检测有以下3步：

步骤1：检测参照（仅有BCA试剂，没有蛋白）。软件必须首先检修一个参照盒至少一个标准品，或者检测两个标准品，然后才能进行样品检测。

步骤2：检测标准品。对每个标准品，最多可以进行5个重复检测，

步骤3：样品检测。当标准曲线建立完成后，红色钮变成绿色，这表示用户可以开始进行样品检测了。通过标准曲线和样品的吸光值来计算样品的浓度。

标准曲线特征

标准曲线能被保持并重新登陆，使用 StandardCurve 下拉菜单选择保存或重新登陆功能，选择 ViewStandardCurve 键让用户在任何时候查看曲线。

TheDeletePoint键使用户删除点，首先选择表格中需要删除点的数据，然后点击 DeletePoint 键进行删除。如果对一特定的标准品产生错误的或者非典型的读数，所有重复检测的数据可以通过选择 Resetthisstd 来清空，而且所有标准曲线可以通过 Reset This Window (F11)来删除。

退出BCA模块

建议在完成所有操作后再退出NanoDrop1000超微量分光光度计BCA模块软件。