超微量光谱仪应用于教学：DNA的的分离提取及含量测定

动物组织中DNA的分离提取及含量测定是目前国内高校普遍开设的经典生物化学实验项目，在保留原有浓盐法提取基因组DNA、二苯胺法检测DNA含量的基础上，新增目前广泛使用的商品化试剂盒进行DNA的提取、采用超微量分光光度计检测DNA的实验内容。

DNA的的分离提取及含量测定教学内容及存在的问题：

1. 实验项目独立开设，学生的思维仅局限于本实验原理和技术的掌握，缺少对相关知识联系和技术整合的意识和能力；
2. DNA提取及含量检测技术发展迅速，而传统教学中采用的实验技术、手段相对落后，学生的学习积极主动性不高；
3. 实验数据多为正结果，学生缺少反思的原动力，不利于学生发现问题、分析问题和解决问题能力的培养；
4. DNA与二苯胺反应产生的蓝色不易退色，极易造成比色皿的污染，严重影响实验检测结果的精密度和准确性，不利于学生对实验结果作出科学的分析。这些问题严重影响了实验教学效果，亟须改革。

DNA的的分离提取及含量测定

• 基因组DNA的提取。分别采用浓盐法（根据参考书《生物化学习题及实验技术》、试剂盒法（参照Solarbio动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒说明书）2种方法，提取动物肝脏组织中的基因组DNA。
• DNA浓度检测。①采用Nanodrop2000超微量分光光度计检测浓盐法和试剂盒法2种提取方法获得的DNA样品浓度，计算DNA的提取率。此外，根据A260/A280的比值，还可以判断提取DNA的纯度。②利用二苯胺法检测DNA含量，根据标准曲线，计算DNA的提取率。

DNA的的分离提取及含量测定实验结果与分析

超微量分光光度计和二苯胺法检测DNA质量的效果比较。设计几个问题：超微量分光光度计和二苯胺法检测DNA含量的结果是否一致？导致检测结果不一致的因素可能有哪些？2种检测方法各有什么优缺点？影响DNA提取质量的因素有哪些？如何对DNA进行纯度鉴定？