超微量分光光度计 测量阿胶DNA的提取效率

阿胶加工主要工序包括：备料、泡皮、洗皮、焯皮、化皮、过滤、真空浓缩、打沫、加辅料、凝胶、切胶、晾胶、擦胶印字、灭菌和包装入库等49个工序。本研究拟从阿胶加工工艺过程中的8个代表性阶段分别取样，提取驴基因组DNA，并超微量分光光度计分别对DNA质量进行浓度检测，旨在了解阿胶加工过程中驴基因组DNA的提取效率。

材料

阿胶生产过程中的样品分别包括化皮后的原料胶、双效阶段、浓缩前、浓缩后、加辅料前和凝胶等加工阶段，每个阶段重复取样3份。

试剂与仪器

ExTaq酶、dNTPs、lOxBuffer、DNA分子量MarkerDL1000bp、2000bp、15kb、23kb，电泳上样缓冲液等PCR反应试剂；DNA分子量MarkerDL23kb；引物与探针；动物组织DNA提取试剂盒G1N70—1KT；BestarRealtimePCRMasterMix。

恒温混匀仪；凝胶成像仪Bio-Rad；超微量分光光度计NanoDrop2000；DNA测序仪ABI3730XL；普通PCR仪；高速离心机5424D型；荧光定量PCR仪。

阿胶DNA的提取方法

基因组DNA提取称取阿胶加工工艺过程中化皮、双效前后、浓缩前后、加辅料前和凝胶各阶段样品及阿胶粉各1.0g，阿胶DNA的提取参照张全芳等文献介绍。称取驴皮0.1g，驴皮的提取利用动物组织提取试剂盒，参照说明书提取，每个样品重复提取3次，最后加入5Op.L1xTEBuffer溶解，-20℃保存备用。

分光光度法检测阿胶的DNA浓度

将不同加工阶段阿胶中问体和成品提取的DNA使用超微量分光光度计NanoDrop2000检测，用1xTEBuffer作空白对照，记录DNA的浓度、A260和A280比值。计算阿胶8个主要生产加工过程中基因组DNA提取产量，利用公式：DNA提取产量(ng·g)=(基因组DNA浓度×体积)／取样质量以上各实验均重复3次以上，数据表示为平均值±标准方差，组间方差由PLSD检验分析，P<0.05为有效统计学差异。

DNA超微量分光光度计分析结果

A260/A280是核酸纯度的指示值，纯度好的DNAA260/A280比值约为1.7～1.9，表3可以看出，阿胶加工前期阶段化皮、双效前后与鲜驴皮的A260/A280在1.7～1.9之间，DNA浓度83.23～145.30ng·IxL～，提取的DNA纯度和浓度都比较理想。随着阿胶进一步加工，浓缩前后及加辅料前后到凝胶阶段A260/A280值下降至<1.7，DNA浓度也降低至23.22～82.10ng·L区间，推测主要原因是阿胶中富含胶原蛋白，提取的DNA可能仍含有大量蛋白污染，随着加工过程的深入，基因组DNA完整性进一步被破坏，所以提取的浓度也随之降低。