NanoDrop2000超微量分光光度计测量核酸浓度步骤

 

1、首先，微量分光光度计样品保留系统的上部和下部的光学表面清洁干净的去离子水的2至3uL，吹打到较低的光学表面。

2、关闭的杠杆臂，确保上层基座与去离子水接触。抬起杠杆臂和一个清洁，干燥，无尘的实验室擦拭光学表面擦去。

3、打开NanoDrop软件，并选择核酸应用程序。使用一个小批量，校准移液器1缓冲液配药到较低的光学表面，以执行一个空白的测量。下的力臂，并选择“空白”，在核酸应用。

4、一旦空白测量完成后，两个光学表面与一个清洁，干燥，无尘的实验室擦拭干净。

5、选择适当的常数要测量的样品。

样品类型	选择选项	用于计算含量恒定
双链DNA	DNA的50	50
单链DNA	DNA的33	33
核糖核酸	RNA-40	40
寡糖	自定义	15-150

表1：典型的核酸直接A280吸光度测量，使用一个NanoDrop微量分光光度计，一个传统的试管为基础的分光光度计使用一个TrayCell微蜂窝比色皿，在结合PicoGreen检测微量NanoDropfluorospectrometer的浓度范围。

6、免除到较低的光学基座1uL的核酸样品，并关闭力臂。由于测量是独立的体积，样品只需要，弥合两者之间的光学表面为测量的差距。

7、在应用软件中，选择“测量”。该软件会自动计算出的核酸浓度和纯度比例。下面的示例测量，审查的光谱输出。

8、该软件会自动计算出的核酸浓度和纯度比例。样品的测量，光谱图像，以评估样品的质量审查。

9、一个典型的核酸样本，将有一个非常有特点的姿态。

10、与特定的核酸分离技术相关的常见污染物的来源包括苯酚/Trizol法和列提取。在苯酚/Trizol法提取的情况下，残留试剂的污染可能是由220至240nm之间的异常光谱，以及在260〜280nm区域的变化。相反，从列提取的残留胍可能导致附近230纳米的高峰期，在从230纳米到约240纳米的槽的转变。

11、为了准确地评估样品的质量，260/280或二百三分之二百六十○比率应在与整体的光谱质量结合分析。纯核酸通常产量的1.8〜260/280的比例和DNA和RNA的2.0〜260/280的比例，分别。这个比率是依赖于用于空白和样品测量的缓冲pH值和离子强度。酸性溶液中会根据代表0.2-0.3的比例，而一个基本的解决方案将超过代表比例由0.2-0.3。显着不同纯度率可能表明存在蛋白质，酚或其他污染物，达到或接近280nm处的强烈吸收。二百三十零分之二百六十零纯度比一个“纯”核酸一般在1.8-2.2范围内的值的第二项措施是DNA的纯度。纯度的比例明显低于预期值低可能表明所使用的隔离技术，可能需要进一步优化。

12、NanoDrop分光光度计也可以用来量化的蛋白质，使用直接吸光度或蛋白质比色法。为了确保正确的列形成和重复性，2uL的样品应为蛋白质样品。