怎样用NanoDrop 1000检测荧光染料吸光值

NanoDrop 1000超微量分光光度计检测荧光染料的吸光值，能够检测最少0.2pmol/ml的染料。预先选择高质量的荧光标记的杂交探针用于基因表达芯片能够排除有缺陷样本以及获得高的研究结果。

荧光染料检测

当前在MicroArray模块下预设了9种荧光染料，用户可以通过主菜单中的Dye/ChromophoreEditor来添加荧光染料。

染料可以通过下图界面或者通过Dye1和Dye2盒来选择，其各自的吸光波长，激发效率，260nm盒280nm的校正值都会被自动用来检测和计算浓度NanoDrop的默认设定Dye1为Cy3，Dye2为Cy5，在下拉菜单的荧光染料中还有以个选择时 None，选择 None 不能计算和数字显示相应的染料。

NanoDrop 1000样本需要的体积

最少1ul，建议使用1.5-2ul以获得准确的结果。

NanoDrop 1000测量范围

NanoDrop 1000独特的屏幕特征

• 最大吸光值：定义纵坐标的最大值。
• 样本类型：选择所要测量核酸的类型，用户可以选择 DNA-50 来测量双链DNA，RNA-40来测量RNA，ssDNA－33来测量单链DNA，或者 other 来测量其他核酸。默认为DNA-50。如果 other 被选择了，用户可以在15-150之间选择分析常数。
• λ and Abs：用户可以选择波长和相应的吸光值。可以通过移动指针或使用波长盒左边的上/下箭头来选择波长。
• Dye1(or2)：用户选择的染料
  • Abs.Norm：所选择的染料在1mm光程下的标准吸光值
  • pmol/ul：依赖于染料激发效率计算的浓度
• ng/ul：样品计算中使用260nm的吸光值减去340nm的吸光值以及核酸分析常数来计算核酸浓度。
• ShowReport：200个样本版式，然而可扩增最多容纳上千个样本。
• 260/230：样品260和230吸光值的比值，这是检测核酸纯度的第二指标，260/230值要比260/280的值大，通常在1.8-2.2，如果比值降低，表明样本存在杂质。

基线计算 & 标准化

软件对所有的读数的显示的可见光谱在750nm处进行标准化并且自动计算在400和750nm之间的基线以用来进行浓度计算。绿色的垂直线代表Dye1的峰波长位置，红色的垂直线代表Dye2的峰波长位置。